Presentación del grupo 5390 - 2012-1.

MODELOS EXPERIMENTALES DE TENIOSIS POR Taenia solium EN ROEDORES

Proyecto: Estudio de la respuesta inmune contra la calreticulina de Taenia solium

Responsable:­

Dra. Ana Flisser (Bióloga), Investigadora Titular “C”, Departamento de Microbiología y Parasitología, Facultad de Medicina, UNAM, SNI nivel 3.

Profesoras asociadas:­

cD. en C. Fela Mendlovic Pasol (LIBB, MenC), Profesora Asociada “B”, Departamento de Microbiología y Parasitología, Facultad de Medicina, UNAM.­

Dra. Guillermina Ávila Ramírez (QBP, MenC), Profesora Asociada “B”, Departamento de Microbiología y Parasitología, Facultad de Medicina, UNAM.

Antecedentes y perspectivas

Múltiples estudios epidemiológicos han demostrado que el principal factor de riesgo para tener neurocisticercosis es la presencia de un portador de Taenia solium intestinal en el ambiente cercano (Flisser et al, 2005). Sin embargo, debido a que el ser humano es el único hospedero definitivo natural para Taenia solium, se desconocen muchos aspectos de la relación hospedero-parásito. En el laboratorio hemos desarrollados modelos experimentales para T. solium en los cuáles hemos descrito varios parámetros de la respuesta inmune (Flisser et al 2010). También aislamos y caracterizamos la calreticulina de Taenia solium (TsCRT, Mendlovic et al, 2004). La calreticulina (CRT) es una proteína multifuncional, ubicua y muy conservada, lo que denota su importancia en los sistemas biológicos. Inicialmente fue descrita en el lumen del retículo endoplásmico y su principal función es la regulación de la homeostasis de Ca2+ que tiene influencia sobre diversos procesos celulares (Michalak, et al., 1999). Sin embargo, recientemente se ha identificado en la superficie de varias células, así como en productos de E/S de varios helmintos (Suchitra, et al., 2005; Guillou, et al. 2007). La CRT interacciona con el sistema inmune del hospedero, pues los pacientes con tripanosomosis, esquistosomosis y oncocercosis tienen anticuerpos anti CRT (Rokeach et al, 1994; Marcelain et al, 2000) e interesantemente se sobre-expresa en parasitosis intestinales crónicas en ratón (Morgan et al, 2006). Adicionalmente, la CRT de Heligmosomoides polygyrus, además de ser secretada, induce la producción de IL-4 e IL-10 (citocinas tipo Th2 y regulatorias) y se une a células dendríticas por medio del receptor carroñero A (Rzepecka et al. 2009). Se ha propuesto que la CRT de parásitos podría representar un patrón molecular asociado a patógenos capaz de interaccionar con células dendríticas y dirigir la respuesta inmune hacia un perfil Th2 (Flisser and Mendlovic, 2010; Terrazas et al, 2010). Un hallazgo reciente de importancia, es que la inmunización oral con TsCRT induce alrededor de 40% de protección en el modelo experimental del hámster dorado administrado en presencia de toxina colérica (León-Cabrera et al, 2009). Además, estudios preliminares indican que la TsCRT induce citocinas tipo Th2 (IL-4 e IL-5) en ratones inmunizados por vía oral con este antígeno en presencia de toxina colérica (Fonseca-Coronado et al, 2010).

Objetivo general:

• Expresar TsCRT en bacterias BL-21
• Purificar la TsCRT recombinante
• Valorar la expresión y pureza de la TsCRT por electroforesis
• Inmunizar por vía oral ratones con TsCRT recombinante
• Examinar la respuesta inmune humoral contra la TsCRT
• Evaluar la respuesta inmune celular intestinal contra la TsCRT
• Valorar la producciónde citocinas debida a la inmunización con TsCRT
• Caracterizar la participación de células dendríticas en la respuesta inmune

Semestre 1

·Leer la bibliografía básica para comprender el tema

• Transformar bacterias BL-21 con el plásmido pET23a-TsCRT
• Inducir la expresión de las bacterias transformadas
• Purificar la TsCRT recombinante

·Inmunizar ratones Balb/c con TsCRT por vía oral sin adyuvante

·Obtener suero, heces y lavados intestinales de ratones inmunizados y controles

·Procesar las muestras y congelarlas adecuadamente

·Obtener biopsias de nódulos linfáticos mesentéricos (NLM), bazos e intestinos

·Realizar experimentos de estimulación in vitro y guardar congelados los sobrenadantes

·Determinar la producción de citocinas (IFNg, IL-12, IL-4, IL-5, IL-10, TGFb, y el factor de transcripción FoxP3) mediante RT-PCR en tiempo real, utilizando células de NLM y bazos

·Determinar la presencia de las mismas citocinas en biopsias de intestinos

·Identificar las células dendríticas en la mucosa intestinal y NLM en ratones inmunizados a diferentes tiempos post-inmunización

·Colocalizar a la TsCRT en las mismas muestras

·Analizar los sueros, heces y lavados intestinales de ratones por un ensayo inmunoenzimático (ELISA) para detectar TsCRT

• Realizar ELISAs para detectar IgG, IgA e IgE específicas contra TsCRT en suero, heces y lavados intestinales de animales inmunizados y controles
• Realizar western blots para analizar la especificidad de los anticuerpos generados

Plan de trabajo

Criterios de evaluación

• Participación activa en la lectura y discusión de artículos
• Participación activa en el trabajo de laboratorio
• Participación activa en la colecta y análisis de datos
• Asistencia, en la medida de lo posible a los seminarios del grupo

El grupo cuenta con un laboratorio bien instalado en el Departamento de Microbiología y Parasitología de la Facultad de Medicina, UNAM y con financiamiento de diversas fuentes

Temas de tesis

Los objetivos pueden generar tesis para los estudiantes que participen